شرح: خمس خطوات لاكتشاف فيروس كورونا (كوفيد -19)

تم شرح العملية لـ The Indian Express بواسطة الدكتور في رافي ، أستاذ أول ورئيس قسم علم الفيروسات العصبية ، NIMHANS.

شوهد دم مزيف في أنابيب اختبار عليها ملصق فيروس كورونا (كوفيد -19) في هذا الرسم التوضيحي المأخوذ في 17 مارس 2020 (رويترز)

يشرح الدكتور في رافي ، الأستاذ الأول ورئيس قسم علم الفيروسات العصبية ، NIMHANS ، عملية اكتشاف الفيروس التاجي لـ هذا الموقع . فيما يلي الخطوات الخمس:

الجمع والنقل

يقوم مركز الاختبار بأخذ مسحات من تجاويف الأنف وظهر الحلق (البلعوم) ، ويضع العينات في وسط نقل الفيروس الذي يحتوي على أملاح وألبومين متوازنة لمنع الفيروس من التفكك. ثم يتم نقل العينة في التخزين البارد إلى معمل الاختبار.

استخراج الحمض النووي الريبي الفيروسي

فيروسات كورونا مثل SARS-CoV (التي ظهرت في الصين في 2002-03) ، MERS-CoV (التي ظهرت في المملكة العربية السعودية في 2012) ، أو SARS-CoV-2 الحالية التي تسببت في جائحة COVID-19 ، لها تأثير كبير. ، جينومات الحمض النووي الريبي وحيد الشريطة. يستخرج معمل الاختبار الحمض النووي الريبي من العينات ، باستخدام المجموعات المتاحة تجاريًا (مثل تلك التي تنتجها شركات مثل QIAGEN.)

وضع الحمض النووي الريبي في مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل

يضاف الحمض النووي الريبي المستخرج إلى مزيج تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). يتضمن هذا 'المزيج الرئيسي' ، الذي يحتوي على إنزيم 'النسخ العكسي' الذي يحول الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي. يحتوي Master mix على Taq polymerase ، وهو الإنزيم الذي ينتج نسخًا من الحمض النووي والنيوكليوتيدات ، بالإضافة إلى عناصر أخرى مثل المغنيسيوم - وهو أيون ضروري لتضخيم الحمض النووي.

يحتوي مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل أيضًا على 'كواشف' مثل 'البادئات' و 'المجسات'. البادئات هي خيوط معينة من الحمض النووي مصممة للارتباط بالحمض النووي المراد نسخه ؛ تستخدم المجسات لاكتشاف التسلسل المحدد في عينة الحمض النووي. أوصت منظمة الصحة العالمية بادئات أولية وتحقيقات محددة لاختبار COVID-19.

أخيرًا ، يتكون مزيج PCR من جين التدبير المنزلي - جين بشري طبيعي (RNase P) يستخدم لضمان جمع العينات بشكل صحيح ، واستخراج الحمض النووي الريبي.

تضخيم الحمض النووي الفيروسي

يتم وضع العينة ، في مزيج PCR الخاص بها ، في أنابيب أو ألواح ، ثم يتم وضعها في آلة تدوير حرارية تُستخدم لإجراء عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل.

أولاً ، يتم تحويل الحمض النووي الريبي إلى DNA. ثم تبدأ عملية نسخ الجينات. يقوم جهاز التدوير الحراري بتسخين وتبريد الخليط بالعينة ، بالتناوب بين ثلاث درجات حرارة - لإذابة الحمض النووي لفصل الخيطين ، ولربط التمهيدي بالحمض النووي ، ولتكوين خيط جديد - كل ذلك في دورة واحدة تستمر لمدة اللحظة. يقوم جهاز التدوير الحراري بتشغيل 30-40 دورة من هذا القبيل لتضخيم الحمض النووي للتحقق من وجود الفيروس.

الاختبار ضد الضوابط

يتم اختبار الحمض النووي المضخم مقابل عنصر تحكم إيجابي ، والذي يتكون عادة من جينات الفيروس المستنسخة في البلازميد ، وعينة تحكم سلبية ، وهي عينة 'معروفة' تم اختبارها سلبية للفيروس في وقت سابق.

يجب أن يُظهر RNase P تضخيمًا ، ويجب أن يكون التحكم الإيجابي إيجابيًا ، ويجب أن يكون التحكم السلبي سالبًا ، وبعد ذلك أيًا كانت النتيجة التي تحصل عليها للعينة ، هي النتيجة الصحيحة ، كما قال طبيب الفيروسات العصبية الدكتور في رافي. من أجل أن يكون الاختبار صالحًا قبل إصدار النتيجة ، يجب استيفاء بعض 'معايير الصلاحية'.

لا تفوت من شرح | كيف يعمل اختبار COVID-19

إذا كان جين التدبير المنزلي (RNase P) موجبًا ، وكان التحكم الإيجابي إيجابيًا ، وكان التحكم السلبي سلبيًا ، ولم تظهر العينة أي نتيجة إيجابية لـ PCR ، فسيتم إعلان العينة سلبية بالنسبة للحمض النووي الريبي لفيروس SARS-CoV-2. إذا كانت نتيجة تفاعل البوليميراز المتسلسل إيجابية ، فإن المريض مصاب بـ COVID-19.

شارك الموضوع مع أصدقائك: